我國科學家研發出高階多重實時熒光PCR檢測技術

實時熒光PCR技術是目前應用最為廣泛的核酸檢測技術。然而，由于主流熒光PCR儀器檢測通道數目的限制，單個反應所能檢測的靶基因數目很難超過6個，限制了該技術在檢測涉及多靶點的復雜疾病上的應用。

2月24日，廈門大學研究團隊在《美國國家科學院院刊》(PNAS)雜志上發表了題為“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章，研發出了一種稱為“MeltArray”的熒光PCR新技術，將熒光PCR的單管檢測能力提高了至少一個數量級。

該技術利用了熒光PCR反應中Taq DNA聚合酶的5‘-瓣狀內切酶活性，將位于引物下游的“媒介探針”切割，釋放出“媒介引物”，“媒介引物”結合到反應體系中的分子信標報告探針上。在Taq酶聚合活性作用下，“媒介引物”沿著分子信標延伸，生成具有特定熔點值的熒光雙鏈。由于每個分子信標可以允許多個“媒介引物”形成一系列具有不同熔點值的熒光雙鏈，單個MeltArray多重熒光PCR反應可檢測的總靶基因數目就等于反應中分子信標數量乘以其所容納的“媒介引物”數量。研究團隊實現了單個熒光通道可檢測12個靶標，6個熒光通道的儀器可檢測72個靶標，這是單個閉管實時熒光PCR一步法目前所能檢測的最大靶基因數量。

該研究證實了MeltArray多重熒光PCR技術在不改變現有儀器設備的情況，在遺傳病、傳染病和腫瘤的分子診斷上都有良好靈敏度和特異性，成功推動熒光PCR這一“老技術”再上“新臺階”，填補了長期存在于低階PCR和高通量檢測二者之間的技術空白。

來源：科技部生物中心

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